熱門搜索:大學畢業論文 碩士畢業論文 博士畢業論文 碩士英語論文 碩士mba論文 無憂論文網

當前位置:無憂論文網 > 職稱論文 > 碩士醫學論文 >

甲狀腺乳頭狀癌中BRAF T1799A基因突變與TGF-β的關聯及對腫瘤預后的醫學影響

  • 發布日期:2018-07-12
  • 責任編輯:lgg
  • 論文字數:0
  • 點擊:
  • 論文編號:
  • 論文類型:
  • 論文價格:0
本文是一篇碩士醫學論文,醫學論文格式由以下6部分組成:論文題目;作者署名、工作單位和郵編;摘要(目的、方法、結果、結論);關健詞;正文(資料與方法、結果、結論)參考文獻。(以上內容來自百度百科)今天為大家推薦一篇碩士醫學論文,供大家參考。
 
引 言
 
甲狀腺腫瘤是較常見的內分泌腫瘤,在人群中的發病率為 4%-7% ,其中大部分為良性,有 5%-8%為惡性腫瘤[1]。流行病學資料顯示,全球甲狀腺癌的發病呈明顯上升趨勢,與內陸地區相比,沿海城市的甲狀腺乳頭狀癌(papillary thyroidcarcinoma, PTC)患病率明顯增高。前期在對我醫院近 14 年來 690 例甲狀腺癌的患病趨勢分析后得出,PTC 占 81.74% (564/690),平均確診年齡為 45.39 歲,其在甲狀腺癌中的構成比也呈明顯逐年遞增趨勢[2]。PTC 多呈非連續性多病灶,容易發生淋巴轉移和腫瘤復發。因此 PTC 已經成為危害人類健康的常見的內分泌系統腫瘤。大部分 PTC 是由致癌信號途徑激活導致的,RAS-RAF-有絲分裂原活化蛋白/細胞外信號調節激酶(MEK)-細胞外信號調節激酶(ERK)-絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)途徑的信號旁路是腫瘤基因變異的主要途徑。此信號途徑能夠通過上調細胞增殖和分化的信號表達從而在癌癥的發生和發展中起重要作用[3]。薈萃分析得出 BRAFT1799A 基因突變是 PTC 中最常見的分子缺陷[4],該基因編碼 B 型有絲分裂原激活的蛋白激酶依賴性激酶的激酶,參與 MAPK 途徑的信號傳導[5]。BRAF T1799A 基因突變的患病率有地域和種族的差別[6],其發生率在 29%~83%[7-9],平均發生率 44%[4]。本研究組前期研究顯示青島地區 BRAF T1799A 基因突變率為 37.5%,略低于國外報道[10]。有研究表明,BRAF T1799A 突變與 PTC 發生淋巴結轉移、術后復發、發生腺外浸潤及腫瘤高分期密切相關[7,8,11,12]。前期研究也證實,BRAF T1799A 陽性者腫瘤浸潤和腫瘤Ⅲ級以上分級發生率高于陰性患者,且該基因突變與預示臨床預后不良的血小板源性生長因子(PDGF)的表達呈強相關性[10,13]。BRAF T1799A 基因突變影響PTC 生長方式及其臨床預后,該基因突變可以作為一項的預后因子,但具體機制不詳。
轉化生長因子(transforming growth factor,TGF-β)是一類多功能蛋白質,可以影響多種細胞的生長、分化、凋亡及免疫調節等功能。TGF-β通過與細胞膜表面具有絲氨酸/蘇氨酸激酶活性的受體 TβR 結合而激活其受體,并將信號放大并磷酸化細胞內受體調控的 pSmads 蛋白,形成復合體進入細胞核,與相關的轉錄因子調控靶基因的表達。TGF-β在腫瘤的發生、發展中具有雙重作用[14]:在腫瘤發生的起始階段扮演抑制者的角色,而在腫瘤進展期能夠促進腫瘤細胞浸潤、轉移。體外實驗表明[15],在正常甲狀腺細胞中,TGF-β抑制細胞增殖,誘導凋亡;而在甲狀腺癌細胞中 TGF-β表達增強,其促凋亡的作用基本喪失,而促分化、促浸潤的作用占主導地位。BRAFT1799A 基因突變與 TGF-β異常表達之間的聯系存在爭議。無論是否發生 BRAF 基因變異,TGF-β在非局限性 PTC 中的表達較局限性腫瘤組織中明顯升高[16]。鈉/碘共同轉運體(sodium/iodide symporter,NIS)主要存在于甲狀腺濾泡細胞基底膜上,是非常重要的一種碘代謝相關因子。NIS 在碘的攝取與轉運過程中發揮著重要的作用,它可促進碘的主動轉運,使碘順著電化學梯度從間質進入細胞內。Patel等證實[17],近期越來越多的研究者發現[18-22],在甲狀腺癌中 NIS 的表達是下降的,認為甲狀腺癌的攝碘缺陷在于 NIS 基因表達的減少或缺失。然而,也有學者提出另一種觀點[23],即甲狀腺癌組織的 NIS 是胞質型表達為主,靶向定位障礙造成攝碘功能受損,作為代償 NIS 的表達量反而增加,但這種無效表達同樣會造成細胞攝碘率的下降。甲狀腺癌中NIS表達異常的機制涉及到癌細胞中某些相關基因的突變。Romei[24]等學者也證實,BRAF T1799A 基因突變與 TPO 及 NIS 基因的低表達相關聯,并能夠影響 NIS 基因的靶向定位,從而降低對放射性碘的敏感性。Riesco[25]等在體外實驗證實, BRAF T1799A 基因突變可抑制 NIS 基因轉錄活性,干擾其在細胞膜上的定位,MEK 抑制劑不能緩解 BRAF 基因突變引起的 NIS 表達下調,由此說明 BRAFT1799A 基因突變并非通過 MAPK 通路影響 NIS。而阻斷 TGF-β/Smad 信號通路后,NIS 的受抑制作用解除。而該團隊的另一項研究表明[15],Smad 蛋白的抑制劑可使NIS 的表達量增加,該研究發現 BRAF 基因突變陽性的腫瘤中 TGF-β表達量明顯高于突變陰性者,而 TGF-β表達量越高,而 NIS 表達量越低。本研究的第一部分旨在證實 BRAF T1799A 基因突變與 TGF-β之間的關聯,二者是否共同作用于 NIS 而影響腫瘤預后。第二部分旨在研究 PTC 中 BRAF T1799A 基因突變對與 TGF-β相關的上皮間質轉化的影響。
.........
 
第一部分 甲狀腺乳頭狀癌BRAF T1799A基因突變與TGFβ表達對腫瘤預后的影響
 
1 前言
BRAF T1799A 基因突變是甲狀腺乳頭狀癌常見的遺傳學事件,是 MAPK 信號通路最強有力的啟動者[26]。多數研究發現 BRAF T1799A 基因突變與高侵襲性的臨床病理學因素及甲狀腺癌的復發相關,在甲狀腺癌的發生與發展中也有其重要意義[12,27,28]。Xing 等[12]揭示 BRAF T1799A 基因突變型 PTC 的細胞攝碘功能較野生型的差。發生 BRAF T1799A 基因突變的 PTC 中 NIS 表達降低且不能正常定位于濾泡細胞基底膜上[25],預示著對放射碘治療效果差,從而影響腫瘤預后。TGF-β通過調節 Smad 通路中多項靶基因的表達而發揮作用[29],使正常的成纖維細胞的表型發生轉化,使之遷移并侵襲腫瘤細胞[30]。TGF-β在多類腫瘤中表達增多[31],在甲癌中也呈過表達狀態[32-34]。體外研究結果顯示,甲癌細胞中 TGF-β表達量越高,而 NIS 表達量越低;給予 Smad 蛋白的抑制劑可使 NIS 的表達量增加;進一步研究表明,BRAF T1799A 基因突變可通過誘導 TGF-β分泌,從而抑制 NIS 表達,降低甲狀腺濾泡細胞的攝碘能力,增加甲狀腺癌的惡性程度[15]。然而,BRAF T1799A基因突變與 TGF-β異常表達之間的聯系存在爭議。Eloy[16]等學者研究結果顯示,TGF-β在非局限性 PTC 中的表達較局限性腫瘤組織中明顯升高,而這種影響與 BRAF基因突變無相關性。本研究旨在證實 BRAF T1799A 基因突變與 TGF-β之間的關聯,驗證二者是否共同作用于 NIS 而影響腫瘤預后。
 
2 材料與方法
 
2.1 研究對象與標本來源
收集2014年1月至2014年6月在青島大學附屬醫院行手術治療的甲狀腺乳頭狀癌患者的術后新鮮病理組織80例,所有患者均為初發,且未接受放射治療。標本經病理證實,并在離體后1h內置-80℃低溫冰箱中保存。標本采集得到醫院和患者的知情同意,不影響今后的診斷和治療。采用北京艾德萊生物科技有限公司提供的組織/細胞 DNA 快速提取試劑盒提取DNA,具體操作步驟如下:(1)從-80℃冰箱中取出凍存管中的甲狀腺新鮮病理組織,用解剖刀切成小碎塊,后取 30-50mg,轉入裝有 180ul 組織裂解液 TL 的 1.5ml 離心管中,吹打混勻。(2)加入 20ul 蛋白酶 K 溶液(20mg/ml),立刻渦旋振蕩充分混勻。(3)將裂解物放置在 55℃水浴 1 小時,期間數次振蕩幫助裂解。(4)加入 200ul 結合液 CB,振蕩混勻,70℃放置 10min。(5)冷卻后加 100ul 異丙醇,振蕩,可見絮狀物。(6)將 1ml 混合液加入吸附柱 AC 中,13000rpm 離心 60s,倒掉收集管中的廢液。(7)加入 500ul 抑制物去除液 IR,12000rpm 離心 30s,棄廢液。(8)加入 700ul 漂洗液 WB,12000rpm 離心 30s,棄廢液,再加入 500ul 漂洗液 WB,12000rpm 離心 30s,棄廢液。(9)將吸附柱 AC 放回空收集管中,13000rpm 離心 2 分鐘,去除漂洗液。(10)取出吸附柱 AC,放入一個干凈離心管中,在吸附膜中央加入 100ul 洗脫緩沖液 EB,室溫放置 5min,12000rpm 離心 1min,將得到的溶液重新加入離心吸附柱,室溫放置 2min,12000rpm 離心 1min。(11)DNA 存放 4℃冰箱,以備基因電泳及測序。
........
 
第二部分 BRAFT1799A 基因突變與 TGFβ信號通路之間的關聯1前言............21
2材料與方法...........23
2.1研究標本............23
2.2實驗試劑、儀器.............23
2.3實驗方法............24
2.4統計分析............28
3結果............29
3.1TβR-II、Vimintin、E-cadherin mRNA 的表達...........29
3.2TGF-β與TβR-II、Vimentin、E-cadherin mRNA表達的關聯.........30
3.3BRAFT1799A 基因突變與 TβR-II、Vimentin、E-cadherin mRNA 表達的關聯...........31
3.4BRAF及TGF-β表達對TβR-II、Vimentin、E-cadherin mRNA表達的影響.......31
3.5TGF-β與 TβR-II、Vimentin、E-cadherin 蛋白表達的關聯.............32
3.6BRAF T1799A基因突變與TβR-II、Vimentin、E-cadherin 蛋白表達的關聯.....33
3.7細胞內抑制MAPK后Vimentin、E-cadherin蛋白的表達.............34
4討論............36
 
4 討論
 
TGF-β是由多種細胞分泌的具有多重生物學效應的細胞因子,主要通過激活Smad通路來實現其促進胚胎生長發育、調節免疫、生長抑制、創傷修復、促進血管生成和細胞外基質沉積等生物學效應。目前已經發現近十種Smad分子。 在TGF-β/Smad 信號通路激活過程中,TGF-β 先與細胞膜表面受體 TβRⅡ結合形成復合物,然后募集并激活受體 TβRⅠ,從而誘導 Smad2/3 的 C 端絲氨酸的磷酸化,活化后的 Smad2/3 可以與 Smad4 形成復合物并進入細胞核[53]。復合物與靶基因啟動子結合,完成對基因轉錄的調控作用。多種轉錄共激活因子和轉錄共抑制因子與Smads直接結合,從而協同參與Smads與基因啟動子的結合以及對基因轉錄的調控[54]。同一TGF-β信號在不同的細胞或同一細胞的不同狀態時會誘導不同的反應,這些是由細胞及亞型的不同和所處的狀態不同引起的[55],其具體機制尚不明了。TGF-β信號通路的正常轉導對腫瘤的發生具有抑制作用,主要源于對細胞周期的阻滯作用[56],通過對細胞周期素( cyclin)、細胞周期素依賴激酶(CDK)、細胞周期素依賴激酶抑制因子(CKI)以及c-myc的表達水平及功能狀態進行調控,使細胞停滯在G1期。TGF-β能降低G1期細胞cyclins和CDKs的活性與表達水平,亦可通過誘導CKIs的表達來實現細胞周期的阻滯作用;原癌基因c-myc是促進細胞從G1到S期進程的轉錄激活因子,TGF-β在多數細胞中還能通過下調c-myc的表達而達到對細胞生長的抑制[57]。腫瘤細胞和腫瘤內的基質細胞經常會提高TGF-β表達量,隨著TGF-β表達量的增加,腫瘤細胞對TGF-β的抑制作用產生抵抗,變得更加具有侵襲性并且向遠處器官轉移[58]。TβRⅡ的突變失活可能是是腫瘤TGF-β 生長抑制信號應答抵抗的原因之一。在TβRⅡ突變的結腸癌細胞系 SW48 中,轉染野生型的 TβRⅡ可以抑制細胞增殖以及其惡性表型,提示 TβRⅡ是一個抑癌基因,在介導TGF-β 生長抑制信號通路過程中必不可少[59]。
.........
 
結 論
 
1、在甲狀腺乳頭狀癌中,無論是轉錄水平還是蛋白水平,TGF-β的表達與 BRAFT1799A 突變無相關性。
2、BRAF T1799A 基因突變和 TGF-β高表達均可影響腫瘤預后,其加和作用遠大于單一因素。
3、BRAF T1799A 和 TGF-β并非通過抑制 NIS 的表達而影響腫瘤預后。
4、BRAF T1799A 基因突變的腫瘤中 EMT 活性增強。
5、BRAF T1799A 基因突變參與了 TGF-β/非 Smad 通路致 EMT 的過程,且作為催化劑與 TGF-β共同影響腫瘤預后。
..........
參考文獻(略)
發布寫論文需求
發布發表需求
發布發表轉讓

無憂論文網 網站公告

[無憂論文網]是專業論文寫作潤色及發表論文網站,提供論文精簡,論文寫作,專業輔導寫職稱論文,專業輔導寫畢業論文,專業輔導寫留學生論文等。
100%品質,100%通過,是您寫作的理想合作網站。我們的客戶風雨同舟,幫廣大客戶解決各類寫作和發表難題。

新疆时时开奖历史记录